ATCC凍干菌種活化方法
更新時(shí)間：2012-10-11 瀏覽次數(shù)：4464
低溫保存管（cryo tube）中之一般菌種臨時(shí)存放及活化
A. 低溫保存管之臨時(shí)存放及解凍
1. 低溫保存管（cryo tube）應(yīng)存放于－20℃ ~ －80℃之低溫條件下。
2. 準(zhǔn)備 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在電氣水浴槽中改放酒精，不可以火加溫，以免危險(xiǎn)；若以 37℃水浴取代，應(yīng)避免水中微生物污染），其中事先安放小試管架（可放置 cryotube 之大?。?，液面不可高達(dá)管塞。
3. 將 cryotube 從低溫保存條件中取出，置于 37℃浴槽之小試管架上。
4. 不斷輕微搖動(dòng) cryotube，液面不可高至管塞，直至結(jié)冰*溶解（約需 2 分鐘）。
C. 菌株活化: 在無(wú)菌操作下
1. 用無(wú)菌微量吸管，從已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固態(tài)培養(yǎng)基（培養(yǎng)基編號(hào)及溫度示于菌株訂購(gòu)單）某一邊緣附近，以劃線法接種于培養(yǎng)基。
2. 將接種好的培養(yǎng)基置于溫度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
D. 圖示
（1）金屬接種環(huán)
（2）平板劃線法
冷凍干燥管之開管說明
下列步驟請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下操作：
1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加熱外管之。
2、滴數(shù)滴無(wú)菌水于加熱處，使外管破裂，再以硬棒敲破。
3、取出隔熱纖維紙和內(nèi)管，以滅菌過的鑷子取出內(nèi)管之棉塞。
4、（ a ） 適用于細(xì)菌
用無(wú)菌吸管，吸取0.3-0.5 ml之液體培養(yǎng)基，滴入內(nèi)管內(nèi)，并輕微震蕩（可用該吸管協(xié)助），直到均勻懸浮。
（ b ） 適用于霉菌、酵母菌
用無(wú)菌吸管，吸取0.3-0.5 ml無(wú)菌水，滴入內(nèi)管內(nèi)，待干燥粉末溶解后，以無(wú)菌吸管吸取并滴入約含有5ml無(wú)菌水之試管內(nèi)，輕微震蕩使其均勻后，靜置30至60分鐘。
5、取0.1-0.2 ml之菌體懸浮液于的平板培養(yǎng)基上，做劃線分離培養(yǎng)或做成一系列之稀釋，用無(wú)菌L型玻棒均勻涂抹，以檢驗(yàn)菌種之純度及活化情形，而剩余的菌體則全部移入的液體培養(yǎng)基內(nèi)，并依的溫度培養(yǎng)之。
6、某些菌種經(jīng)過冷凍干燥保存后，遲滯期 （ lag period ） 較長(zhǎng)，必須等培養(yǎng)二倍時(shí)間后才能長(zhǎng)出，且再經(jīng)過一、二次繼代培養(yǎng) （Subculture） 后才能正常生長(zhǎng)。經(jīng)過以上的努力后仍培養(yǎng)失敗，才視為不能活化。
7、若菌種未能活化，或活化之菌落有疑問時(shí)，請(qǐng)于收到菌種之一個(gè)月內(nèi)，以問題菌株反應(yīng)單傳真至本中心，即進(jìn)行處理。
8．未開封之冷凍干燥管，請(qǐng)冷藏于4℃冰箱，切勿冷凍保存。
B. 劃線法
1. 手持金屬接種環(huán)，用酒精燈將接種環(huán)（共約 5 公分）燒至火紅，并不斷來(lái)回?zé)窘饘俟潭U之前約 10 公分，等待約 10 秒鐘，將接種環(huán)前端輕觸培養(yǎng)基邊緣凝膠（無(wú)菌體部份），待接種環(huán)*冷卻后，以環(huán)沾黏菌滴，由培養(yǎng)基邊緣向中央輕輕橫劃緊接的并行線，直到涵蓋 1/3 培養(yǎng)基為止（I 區(qū)）。
2. 灼燒接種環(huán)，待數(shù)秒冷卻后，旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)基自 I 區(qū)涂布的邊緣再橫劃數(shù)條線到未接種的區(qū)域（II 區(qū)）。
3. 重復(fù) 2. 的動(dòng)作完成 III 區(qū)與 IV 區(qū)。
4. 灼燒接種環(huán)，將接種環(huán)歸位。
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