產(chǎn)品分類
RNA提取過(guò)程經(jīng)驗(yàn)分享
更新時(shí)間：2012-12-05 瀏覽次數(shù)：2068
1.RNA提取的樣品很重要，包括樣品的質(zhì)量，細(xì)胞數(shù)，雜質(zhì)含量等等，建議：按照說(shuō)明書(shū)的要求，每毫升TRIzol不超過(guò)100mg再低些在50mg左右;樣品的質(zhì)量一定要控制好；研磨得時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，成粉狀即可，液氮常加（研磨的意義主要是使細(xì)胞與TRIzol的作用更充分，如有團(tuán)塊挑出取質(zhì)舍量）；作用時(shí)間15分鐘；
2.氯仿抽提，一定要混勻，劇烈些沒(méi)關(guān)系。但一定要充分作用；
3.異丙醇沉淀，混勻，冰上操作會(huì)在一定程度上增加RNA產(chǎn)量；
4.75%乙醇清洗一次即可，速度我一般選擇高速8000g-10000g之間的，結(jié)果都可；
5.檢樣，zui主要的是配置的瓊脂糖膠和電泳緩沖液一定要避免RNA酶的污染，如果有固相RNA酶去除劑，可以用其處理電泳槽5-10后（時(shí)間以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)），用高壓后的DEPC水沖洗即可，方便，呵呵；
以上是我認(rèn)為在RNA提取過(guò)程的體會(huì)，歡迎大家討論，至于反應(yīng)的時(shí)間按照說(shuō)明書(shū)調(diào)整，其實(shí)說(shuō)明書(shū)已經(jīng)放的比較寬了，這個(gè)我覺(jué)得沒(méi)有必要討論。