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DNA實(shí)驗(yàn)技術(shù)：凍融法回收DNA片段操作步驟
更新時(shí)間：2013-08-06 瀏覽次數(shù)：1540
1. 紫外燈下仔細(xì)切下含待回收DNA的膠條，將切下的膠條（小于0.6g）搗碎，置于1.5ml離心管中；
2. 加入等體積的Tris-HCl飽和酚（pH 7.6），振蕩混勻；
3. -20℃放置5-10min；
4. 4℃離心10000g×5min，上層液轉(zhuǎn)移置另一離心管中；
5. 加入1/4體積H2O于含膠的離心管中，振蕩混勻；
6. -20℃，放置5-10min；
7. 4℃離心10000g×5min，合并上清液；
8. 用等體積酚/氯仿、氯仿分別抽提一次，取上清；
9. 加入1/10體積3M NaAc（pH 5.2）、2.5倍體積預(yù)冷的無水乙醇，混勻；
10. -20℃，靜置30min；
11. 4℃離心13000g×10min，棄上清，75%乙醇洗沉淀1-2次，晾干；
12. 加適量H2O或TE溶解沉淀。