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感受態(tài)專題：真核細(xì)胞的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)步驟
更新時間：2013-11-11 瀏覽次數(shù)：955
1. 在6孔板中接種1~3×105細(xì)胞/孔，加入2ml*培養(yǎng)基，置CO2孵箱中37℃培養(yǎng)過。
2. 待細(xì)胞長到50-80%單層時，在無菌離心管中配制如下溶液：
i. 溶液A：將4?g待轉(zhuǎn)染的超純DNA稀釋到250?l無血清培養(yǎng)基中，靜置5min
ii. 溶液B：將2-25?l LipofectAMINE 稀釋到250?l無血清培養(yǎng)基中，靜置5min
3. 混合溶液A和B，輕輕混勻，室溫放置15-45min。
4. 用2ml無血清培養(yǎng)基輕輕洗滌細(xì)胞，加入0.8ml無血清培養(yǎng)基/孔，將脂質(zhì)體復(fù)合物滴加到孔中，輕輕搖晃混勻，置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。
5. 用*培養(yǎng)基替換轉(zhuǎn)染液，繼續(xù)培養(yǎng)。
6. 24-72hr后檢測蛋白質(zhì)的表達(dá)或傳代并加入選擇性抗生素以篩選穩(wěn)定表達(dá)株。