細(xì)胞技術(shù)專題：光學(xué)顯微鏡檢測腫瘤細(xì)胞形態(tài)實驗
更新時間：2014-02-20 瀏覽次數(shù)：1304
標(biāo)簽： 光學(xué)顯微鏡 檢測 腫瘤 細(xì)胞形態(tài)
光學(xué)顯微鏡檢測腫瘤細(xì)胞形態(tài)可以：（1）輔助判斷腫瘤細(xì)胞是否凋亡；（2）用于病理檢查；（3）提取腫瘤細(xì)胞微細(xì)結(jié)構(gòu)信息。
詳細(xì)
實驗方法
- 瑞氏-吉姆薩混染法
- HE染色法
| 實驗方法原理 | 吉姆薩染液由天青，伊紅組成。染色原理和結(jié)果與瑞特染色法基本相同。
1）嗜酸性顆粒為堿性蛋白質(zhì)，與酸性染料伊紅結(jié)果，染粉紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)； 2）細(xì)胞核蛋白和淋巴細(xì)胞 胞漿為酸性，與堿性染料美藍(lán)或天青結(jié)合，染紫藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)； 3）中性顆粒呈等電狀態(tài)與伊紅和美藍(lán)均可結(jié)合，染淡紫色，稱為中性物質(zhì)。
PH對細(xì)胞染色有影響。細(xì)胞各種成分均分布蛋白質(zhì)，由于蛋白質(zhì)系兩性電解質(zhì)，所帶電荷隨溶液PH而定，在偏酸性環(huán)境中下在電荷增多，易與伊紅結(jié)合，染色偏紅；在偏堿性環(huán)境中負(fù)電荷增多，易與美藍(lán)或天青結(jié)合，染色 偏藍(lán)。因此細(xì)胞染色對氫離子濃度十分敏感，染色用玻片必須清潔，無酸堿污染。配制必須用甲醇，稀釋染色必須用緩沖液，沖洗用水應(yīng)近中性，否則可導(dǎo)致各種細(xì)胞染色反應(yīng)異常，以致識別困難，甚至造成錯誤。
用途：適合大多數(shù)細(xì)胞組織的染色，包括血涂片、各種組織石蠟切片、冰凍切片、以及各種培養(yǎng)細(xì)胞。染色體顯帶、多種微生物的鑒別染色和細(xì)胞凋亡的檢測等。 |
|---|---|
| 實驗材料 | 腫瘤細(xì)胞 |
| 試劑、試劑盒 | 甲醛 二甲苯 Gimsa染液 Sorensen磷酸緩沖液 香柏油 蒸餾水 |
| 儀器、耗材 | 光學(xué)顯微鏡 樹膠 載玻片 蓋玻片 洗瓶 離心機 離心管 |
| 實驗步驟 | 一、試劑配制
1. 瑞氏染液配制
稱瑞氏染料0.1 g于研缽，少量多次加入AR級甲醇至*溶解，后補充至60 ml棕色瓶密封保存，可加3 ml甘油防止揮發(fā)。
2. 吉姆薩染液配制
0.1 g吉姆薩染料放入有6.6 ml甘油的圓錐燒瓶內(nèi)，56度，水浴90-120 min，當(dāng)染料與甘油充分混合后加入6.6 ml甲醇，充分搖勻后過濾，棕色瓶室溫可保存一周。
二、染色
3. 液化精液2 000/ rmin 離心10 min，等滲鹽水洗3遍，涂片后自然干燥。
4. 臨用前，瑞、吉染液按10：1混合，染色30-60 s。
5. 加等量PBS（pH6.9），再染10 min。
6. 自來水沖洗，自然干燥后，即可鏡檢，也可直接香柏油兼做透明與封片。 |