細(xì)胞技術(shù)專題：人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間：2014-02-25 瀏覽次數(shù)：1050
標(biāo)簽： 臍動(dòng)脈 平滑肌 細(xì)胞培養(yǎng)
人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)可以：（1）獲得人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞；（2）作為重大動(dòng)脈疾病的研究底物；（3）研究血管模型；（4）對(duì)血管疾病的藥理學(xué)和治療繼續(xù)提供信息。
實(shí)驗(yàn)方法
- 消化法
- 貼塊法
| 實(shí)驗(yàn)方法原理 | 運(yùn)用消化法進(jìn)行人臍動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)，并用倒置顯微鏡進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察和用免疫組化對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定。 |
|---|---|
| 實(shí)驗(yàn)材料 | 臍帶 |
| 試劑、試劑盒 | 膠原酶消化液 胰蛋白酶 膠原酶 彈性蛋白酶 DMEM |
| 儀器、耗材 | 眼科剪 滴管 離心機(jī) 培養(yǎng)皿 CO2培養(yǎng)箱 |
| 實(shí)驗(yàn)步驟 | 一、實(shí)驗(yàn)步驟
2. 用滴管輕輕吸出上層細(xì)小脂肪碎塊和油滴，再用無(wú)菌D-Hanks’液反復(fù)清洗8~10 次。
3. 加入 10 倍體積無(wú)菌膠原酶消化液(1 mg/mL)，室溫消化30 min，1000 rpm離心 5 min，棄上清，加1 mg/mL胰蛋白酶 37℃消化 20 min，再次離心5 min，棄上清。
4. 加入胰蛋白酶 37℃消化20 min，再次離心5 min，棄上清。
5. 加膠原酶(1 mg/mL)彈性蛋白酶(0.5 mg/mL) 混合消化液 37℃消化 20 min，再離心5 min，棄消化液。
6. 加混合消化液 37℃消化 20 min，再次離心 5 min，細(xì)胞加含 10% FBS的DMEM培養(yǎng)基重懸，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)皿 37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)即可。 |