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細胞技術專題:細胞生長曲線實驗

更新時間:2014-04-17 瀏覽次數(shù):1211

標簽: 細胞 生長曲線

細胞生長曲線是測定細胞生長數(shù)的常用方法,是判定細胞活力的重要指標。一般細胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁,隨后度過長短不同的潛伏期,即進入大量分裂的指數(shù)生長期。為了準確描述整個過程中細胞數(shù)目的動態(tài)變化,典型的生長曲線可分為生長緩慢的潛伏期,斜率較大的指數(shù)生長期,呈平臺狀的平頂期及退化衰亡4個部分。

實驗方法

  • 細胞生長曲線
實驗方法原理細胞生長曲線是觀察細胞生長基本規(guī)律的重要方法。只有具備自身穩(wěn)定生長特性的細胞才適合在觀察細胞生長變化的實驗中應用。因而在細胞系細胞和非建系細胞生長特性觀察中,生長曲線的測定是zui為基本的指標。細胞生長曲線的測定一般可利用細胞計數(shù)法進行。
實驗材料

細胞

試劑、試劑盒

D-Hanks液 牛血清 RPMI1640 雙抗 0.08%胰酶

儀器、耗材

凈化工作臺 離心機 恒溫水浴箱 冰箱 倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱 吸管 培養(yǎng)瓶 吸頭 槍頭 24培養(yǎng)板 膠塞 微量加樣槍 紅血球計數(shù)板

實驗步驟

1. 取生長狀態(tài)良好的細胞,采用一般傳代方法進行消化,制成細胞懸液。


2. 計數(shù),地將細胞分別接種于21~30個大小一致的培養(yǎng)瓶內或培養(yǎng)孔(以24孔培養(yǎng)板為宜),每瓶或孔細胞總數(shù)要求一致,加入培養(yǎng)液的量也要一致。


3. 每天或每隔一天取出3瓶(孔)細胞進行計數(shù),計算均值。培養(yǎng)3~5 d 常要給未計數(shù)的細胞換液。


4.  以培養(yǎng)時間為橫軸,細胞數(shù)為縱軸(對數(shù)),描繪在半對數(shù)座標紙上,連接成曲線后即成該細胞的生長曲線。

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注意事項

1.  細胞生長曲線雖然zui為常用,但有時其反映數(shù)值不夠,可有20~30%的誤差,需結合其它指標進行分析。


2.  現(xiàn)在很多實驗室利用培養(yǎng)板采用MTT法進行生長曲線測定,較為簡便。


3.  標準的細胞生長曲線近似“S”形,一般在傳代后*天細胞數(shù)有所減少,再經(jīng)過幾天的潛伏適應期,然后進入對數(shù)生長期,達到平臺期后生長穩(wěn)定,zui后到達衰老。


4.  在生長曲線上細胞數(shù)量增加1倍時間稱為細胞倍增時間,可以從曲線上換算出。

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